BioximiaForYou

Amilase

Alpha-amylase (diastase, alpha-1,4-glucan-4-glucanohydrolase) termasuk dalam kelas hidrolase yang mengkatalisis hidrolisis polisakarida, termasuk pati dan glikogen, menjadi dekstrin dan di- dan monosakarida sederhana (maltosa, glukosa).

Amilase dalam konsentrasi terbesar adalah di pankreas dan kelenjar saliva, masing-masing - dalam bentuk isoenzim pankreas dan saliva. Dalam kondisi fisiologis, serum amilase terdiri dari 40% amilase pankreas dan 60% amilase saliva. Dengan menggunakan inhibitor atau pemisahan spesifik dengan elektroforesis, dimungkinkan untuk menentukan asal enzim yang ada dalam plasma. Amilase dikeluarkan dari plasma oleh ginjal dan diekskresikan dalam urin. Hal ini menyebabkan kandungan informasi yang lebih besar menentukan aktivitas alpha-amylase dalam urin sebagai tes menilai keadaan fungsional pankreas. Pertumbuhan aktivitas amilase adalah yang paling penting dalam diagnosis penyakit pankreas.

Nilai klinis dan diagnostik:

Aktivitas alfa-amilase darah dan urin sangat bervariasi pada siang hari.

Hyperamalasemia - peningkatan aktivitas amilase dalam serum darah.

Ø Pankreatitis akut - nilai maksimum terjadi dalam 6 - 12 jam pertama setelah timbulnya gejala penyakit. Setelah waktu ini, aktivitas enzim menurun, menjadi normal dalam 2-5 hari. Jika aktivitas tetap meningkat selama lebih dari 5 hari, ini menunjukkan peningkatan peradangan.

Ø Eksaserbasi pada pankreatitis kronis

Ø Perforasi ulkus duodenum

Ø Obstruksi usus

Ø Apendisitis akut

Ø Alkaloid (morfin, heroin, kodein)

Ø Keracunan metanol

Ø Dosis etanol dalam jumlah besar (untuk alkoholik)

Hypoamylasemia - penurunan aktivitas amilase dalam serum darah (praktis tidak memiliki nilai diagnostik).

Ø Nekrosis pankreas

Ø Infark miokard

Hyperamalazuria - peningkatan ekskresi amilase dalam urin.

Ø Pankreatitis akut - peningkatan aktivitas enzim diamati selama 24 jam pertama peradangan. Peningkatan ekskresi enzim dalam urin berlangsung selama 7 sampai 10 hari ke depan, meskipun fakta bahwa aktivitas amilase dalam darah setelah 3-4 hari adalah normal.

Ø Kanker pankreas

Ø Perforasi ulkus duodenum

Ø Penyakit batu empedu

Ø Penyakit kelenjar ludah, parotitis, batu di saluran saliva

Hypoamylase - penurunan pelepasan amilase dalam urin.

Ø Penyakit ginjal

Ø Penyakit hati

"Penentuan aktivitas alfa-amilase dalam cairan biologis dengan metode Karavey terpadu"

Prinsip: di bawah aksi alpha-amylase, pati dihidrolisis untuk membentuk produk yang tidak memberikan reaksi warna dengan yodium. Intensitas penurunan warna kompleks iodin-pati per satuan waktu sebanding dengan aktivitas enzim.

Bahan yang diselidiki: serum segar, urin.

Kit ini meliputi:

Reagen №1 - buffer

Reagen No. 2 - substrat terkonsentrasi

Reagen №3 - larutan yodium pekat

Reagen No. 4 - larutan kalium fluorida

Reagen No. 5 - asam klorida

Persiapan reagen untuk prosedur analisis:

Solusi kerja substrat: campur reagen No. 1 dan No. 2 dengan perbandingan 24: 1.

Solusi kerja yodium: campuran air suling, pereaksi No. 3 dan pereaksi No. 4 dalam perbandingan 7: 1: 2.

Solusi kerja asam klorida: encerkan isi botol nomor 5 dengan air suling 16 kali.

Kursus penentuan:

Reagen

Sampel berpengalaman

Kontrol sampel

BioXplorer

Amilase

α-Amylase [α - (1,4) -glucan-4-glucanohydrolase, KF 3.2.1.1] adalah enzim yang menghidrolisis ikatan 1,4 α-glikosidik internal dari pati, glikogen dan polimer glukosa lainnya. Pada manusia, sumber utama α-amilase adalah pankreas dan kelenjar ludah. Sejumlah isoform yang diisolasi dari cairan biologis dan jaringan manusia mungkin merupakan produk heterogen dari perubahan pasca-translasi dari dua keluarga isoenzim amilase, sintesis yang dikodekan oleh dua lokus gen Atu-1, saliva (C) jenis amilase dan Atu-2, pankreas (P) Jenis enzim, terkait erat dalam kromosom 1. Isoenzim C dan P tidak memiliki perbedaan besar dalam komposisi asam amino. Dua isoform diisolasi dengan filtrasi gel pada Sephadex dalam fraksi C-amylase, salah satunya mengandung karbohidrat. Massa molekuler isoform yang mengandung karbohidrat, 57 kDa, bebas karbohidrat - 55 kDa. Poin isoelektrik dari isoform utama C-isoamylases dari 5,5 menjadi 6,5. Kelompok p isoamylase memiliki berat molekul lebih rendah (53 kDa) dan tidak mengandung karbohidrat. Titik isoelektrik dari protein ini berkisar dari 5,7 hingga 7,0.

Bukti yang meyakinkan bahwa amilase tipe-P hanya terbentuk di pankreas adalah tidak adanya isoenzim ini pada individu dengan pankreatektomi total. Sebaliknya, α-amilase C-isoenzim dapat disintesis di berbagai organ dan jaringan. Aktivitas C-amilase yang tinggi terpaku pada jaringan tuba falopii dan isi kista ovarium. Kelompok spesifik isoamylases yang diproduksi oleh jaringan organ genital wanita tidak terdeteksi dalam serum atau urin orang sehat; distribusi isoamylases identik pada pria dan wanita. Isoamilase milik kelompok-C juga ditemukan dalam ASI dan cairan luka.

Signifikansi klinis menentukan aktivitas amilase dalam serum.

Penentuan aktivitas serum α-amilase adalah tes yang paling umum untuk mendiagnosis pankreatitis akut. Pada pankreatitis akut, aktivitas enzim dalam serum meningkat 3-12 jam setelah serangan nyeri, mencapai maksimum setelah 20-30 jam, dan kembali normal dengan perjalanan yang menguntungkan dalam waktu empat hari. Aktivitas α-amilase (diastase) dalam urin meningkat 6-10 jam setelah peningkatan aktivitas serum dan kembali normal, paling sering tiga hari setelah kenaikan.

Sekarang diketahui secara luas bahwa peningkatan aktivitas keseluruhan α-amilase tidak spesifik untuk pankreatitis dan penyakit pankreas lainnya. Studi klinis telah menunjukkan bahwa peningkatan aktivitas α-amilase terjadi pada sejumlah penyakit, yang meliputi obstruksi usus, penyakit saluran empedu, radang usus buntu, parotitis, dan kehamilan ektopik. Sensitivitas dan spesifisitas menentukan α-amilase dalam diagnosis pankreatitis akut meningkat dengan perubahan batas nilai normal (tingkat diskriminatif norma dan patologi adalah aktivitas 1,5-2 kali lebih tinggi daripada batas atas norma). Dalam hal ini, penentuan aktivitas α-amilase adalah yang paling informatif pada hari pertama perkembangan pankreatitis akut. Menurut beberapa penulis, penentuan aktivitas serum α-amilase pada pankreatitis kronis tidak memiliki nilai diagnostik.

Pada manusia, α-amilase, yang melewati secara bebas melalui penghalang filtrasi dari tubuh ginjal, menyerap kembali sel-sel epitel tubulus ginjal dengan cara yang sama seperti protein serum berat molekul rendah lainnya. Peningkatan aktivitas serum amilase dapat disebabkan oleh gangguan eliminasi enzim. Contohnya adalah suatu kondisi yang disebut macroamylasemia, ketika suatu enzim terikat pada serum imunoglobulin dan membentuk kompleks makromolekul. Kompleks seperti itu tidak disaring ke dalam urin dan tidak dapat dihilangkan dengan menggunakan mekanisme lain, yang mengarah pada peningkatan signifikan dan kadangkala berkepanjangan dalam aktivitas α-amilase dalam serum darah. Makroamilasemia terjadi pada orang sehat dengan frekuensi 1%, pada individu dengan hiperamylasemia dengan frekuensi 2,5%. Makroamilasemia dapat didiagnosis dengan metode ultrasentrifugasi, ESP, kromatografi gel, tes sederhana dari presipitasi kompleks dengan polietilen glikol juga telah diusulkan.

Aktivitas serum α-amilase sering meningkat pada gagal ginjal, tetapi tidak sepenuhnya jelas apa yang menyebabkan peningkatan ini - peningkatan pembentukan enzim atau penurunan eliminasi. Dalam kasus seperti itu, informasi tambahan dapat diberikan dengan menentukan tingkat ekskresi α-amilase atau perhitungan pembersihan enzim.

Menurut banyak penulis, tes paling sensitif dan spesifik untuk diagnosis pankreatitis adalah tingkat aktivitas P-isoenzyme α-amylase. Tes ini sangat penting khususnya jika aktivitas amilase keseluruhan normal ditemukan pada pasien dengan diagnosis dugaan pankreatitis. Dengan mengurangi aktivitas P-amilase, pankreatitis kronis dapat didiagnosis. Proporsi P-isoamylase dalam aktivitas total α-amylase secara signifikan lebih tinggi dalam urin daripada dalam serum, mungkin karena perbedaan dalam ekskresi isoenzim oleh ginjal. Namun demikian, nilai diagnostik untuk menentukan aktivitas isoenzim α-amilase dalam urin lebih rendah daripada yang ada dalam darah.

Eksperimen - metode dasar sains
Baik pengamatan dan pengukuran dimasukkan dalam metode dasar sains yang kompleks seperti percobaan. Berbeda dengan pengamatan, percobaan dicirikan oleh intervensi seorang peneliti dalam posisi objek yang diteliti, oleh pengaruh aktif pada materi pelajaran.

Tanah adalah komponen unik dari biosfer
Pada akhir abad ke-19. V. Dokuchaev, ilmuwan alam Rusia yang hebat, melalui penelitiannya tentang chernozem dan tanah lain di Lembah Rusia dan Kaukasus, menetapkan bahwa tanah adalah benda alami dalam fitur eksternal dan sifat kekuatan mereka.

Analisis urin
Urinalisis adalah serangkaian tes kimia dan fisik, yang hasilnya menunjukkan berat jenis dan pH sampel serta keberadaan dan tingkat darah, glukosa, dan komponen lain dalam sampel. Karena data dasar gagal ginjal kronis dan menerima.

Amilase

α - Amilase (diastase, 1,4 - a - D - glukan hidrolase, EC 3.2.1.1.) mengkatalisis hidrolisis ikatan α - 1,4 - glukosida dari pati, glikogen dan polisakarida terkaitnya dengan maltosa, dekstrin dan polimer lainnya. Massa molekul enzim adalah sekitar 48.000 D. Molekul tersebut mengandung atom kalsium yang tidak hanya mengaktifkan enzim, tetapi juga melindunginya dari aksi protease, dan aktivitas amilase meningkat dengan pengaruh ion klorin. Dalam darah, itu diwakili oleh dua isoenzim: pankreas - tipe P dan saliva - tipe S, yang masing-masing dibagi menjadi beberapa fraksi. Isoenzim tipe-S umumnya 45-70% (rata-rata 57%), sisanya dalam tipe-P. Kedua isoenzim memiliki sifat katalitik dan imunologi yang hampir identik, sedikit berbeda dalam mobilitas elektroforesis, tetapi dipisahkan dengan baik oleh filtrasi gel pada DEAE - Sephadex. Ada juga makroamilase, yang tidak diekskresikan oleh ginjal, tetapi dapat ditemukan dalam serum darah normal (sekitar 1% dari orang sehat) dan patologi (2,5%).

Aktivitas amilase tinggi diamati di parotis dan pankreas. Namun, aktivitasnya, meskipun jauh lebih rendah, ditemukan di usus besar dan kecil, otot rangka, hati, ginjal, paru-paru, saluran tuba, jaringan adiposa. Dalam darah, enzim dikaitkan dengan protein plasma dan elemen yang terbentuk. Aktivitas enzim adalah sama untuk pria dan wanita dan tidak tergantung pada sifat makanan yang diambil dan waktu hari.

Metode yang ada untuk mempelajari aktivitas a-amilase dalam cairan biologis dibagi menjadi dua kelompok besar:

1. Saccharifying (reductometric), berdasarkan studi tentang gula yang terbentuk dari pati dengan mengurangi efek glukosa dan maltosa.

2. Amiloklastik, berdasarkan pada penentuan residu pati yang tidak beraspal:

• sesuai dengan tingkat intensitas reaksinya dengan yodium. Metode ini lebih sensitif dan spesifik, tetapi akurasinya sangat tergantung pada kualitas pati dan optimalisasi kondisi penentuan.
• suspensi viskositas pati, tidak memiliki akurasi tinggi dan tidak digunakan sekarang.

3. Metode menggunakan substrat kromogenik - didasarkan pada penggunaan substrat - kompleks pewarna, yang di bawah aksi α - amilase hancur untuk membentuk pewarna yang larut dalam air.

4. Metode berdasarkan reaksi enzimatik yang digabungkan:

Pati + H₂Tentang Maltose + Maltotriose + Dextrin

Maltosa + N₂Tentang 2 Glukosa

Glukosa + ATP Glukosa - 6 - F + ATP

Glukosa-6-F + NADF Glukonat-6-F + NADFN

Aktivitas enzim ditentukan oleh laju akumulasi NADPH.

Dua metode amiloklastik disetujui sebagai satu: Karavey (dengan substrat pati resisten) dan Smith-Rohe.

Penentuan aktivitas amilase dengan pewarnaan
substrat untuk perusahaan rekrutmen "Lachema"

Prinsip

α - Amilase mengkatalisis hidrolisis dari substrat pati berwarna yang tidak larut untuk membentuk pewarna yang larut dalam air biru. Jumlah pewarna yang dilepaskan sebanding dengan aktivitas katalitik enzim.

Penentuan aktivitas alfa-amilase.

Alpha-amylase (diastase) adalah enzim yang melakukan pembelahan hidrolitik dari polisakarida menjadi dekstrin, maltosa dan glukosa. Produk akhir amilase tidak memberikan reaksi warna dengan yodium. Kelenjar pankreas dan saliva terkaya dalam amilase. Amilase disekresikan ke dalam darah terutama dari organ-organ ini.

Plasma darah manusia terutama mengandung dua jenis amilase: pankreas dan saliva, jenis ketiga amilase besar atau makroamilase. Dengan urin, amilase pankreas terutama diekskresikan, yang merupakan salah satu alasan mengapa penentuan amilase urin lebih informatif daripada dalam darah untuk menilai keadaan fungsional pankreas. Dipercayai bahwa 65% aktivitas amilase urin disebabkan oleh amilase pankreas, sementara 60% aktivitas serum amilolitik disediakan oleh amilase kelenjar ludah. Pada pankreatitis akut, amilase pankreas meningkatkan serum menjadi 89%, dan dalam urin menjadi 92% tanpa mengubah indeks amilase kelenjar ludah.

Aktivitas amilase dalam darah dan urin mengalami perubahan signifikan sepanjang hari, serta perbedaan individu dicatat. Fluktuasi aktivitas amilase memerlukan studi dalam urin harian untuk menilai fungsi pankreas.

Metode yang ada untuk menentukan aktivitas α-amilase dibagi menjadi 2 kelompok:

1. Metode titik akhir didasarkan pada penentuan residu pati yang tidak tercerna sesuai dengan tingkat intensitas reaksinya dengan yodium (metode Karavey).

2. Metode kinetik.

serum α-amilase - 16-30 g / jam * l

urin α-amilase - 28-160 g / h * l

1. Serum tidak boleh di hemolisis.

2. Kondisi percobaan sangat penting, khususnya waktu persisnya inkubasi 5 menit, sehingga tidak disarankan untuk melakukan studi simultan lebih dari 5 serum.

3. Penentuan aktivitas α-amilase dalam urin dilakukan dengan cara yang sama dengan penentuan dalam darah, namun, dalam kasus hyperamylase, disarankan untuk melarutkan urin dengan perhitungan ulang berikutnya.

4. Aktivitas α-amilase dipengaruhi oleh obat - antibiotik, obat penghilang rasa sakit, dan juga alkohol.

Peningkatan aktivitas amilase, terutama terjadi pada penyakit pankreas.

Pada pankreatitis akut, aktivitas enzim dalam darah dan urin meningkat lebih dari 10 kali lipat. Hiperamalasemia terjadi segera setelah timbulnya penyakit, mencapai maksimum 12-24 jam, setelah itu aktivitas enzim dengan cepat berkurang dan menjadi normal selama 2-6 hari. Biasanya, hipramilazuria berlangsung lebih lama daripada peningkatan aktivitas enzim dalam serum, oleh karena itu, selama 2-3 hari setelah serangan yang menyakitkan, lebih informatif untuk menentukan aktivitas α-amilase dalam urin.

Pada pankreatitis kronis, kanker pankreas, peningkatan aktivitas enzim tidak begitu signifikan. Selain itu, mungkin ada sedikit peningkatan aktivitas enzim pada penyakit disertai dengan gambaran klinis yang serupa dengan pankreatitis akut: radang usus buntu akut, peritonitis, ulkus lambung berlubang, dll.

Oleh karena itu, amylasemia yang diucapkan memungkinkan untuk membedakan pankreatitis akut dari penyakit kronis pankreas, serta dari penyakit akut lainnya di rongga perut.

Hampir selalu amylasemia disertai oleh amylazuria. Tetapi penentuan aktivitas amilase urin merupakan indikator diagnostik yang kurang akurat pelepasan amilase dalam urin berhubungan dengan fungsi ginjal. Sedikit peningkatan dalam amilase dalam darah sambil mengurangi kadar dalam urin dapat dijelaskan oleh pelanggaran fungsi ekskresi ginjal.

Penurunan aktivitas amilase diamati dengan nekrosis pankreas, penyakit hati (hepatitis, sirosis), luka bakar yang luas, diabetes mellitus, cachexia, dll.

194.48.155.252 © studopedia.ru bukan penulis materi yang diposting. Tetapi memberikan kemungkinan penggunaan gratis. Apakah ada pelanggaran hak cipta? Kirimkan kepada kami | Umpan balik.

Nonaktifkan adBlock!
dan menyegarkan halaman (F5)
sangat diperlukan

Penentuan amilase dalam cairan biologis

Amilase dalam darah dan berapa level indikator ini normal

• Apa enzim ini
• Metode untuk menentukan
• Norma
• Alasan kenaikannya
• Kurangi

Salah satu komponen penting dari analisis biokimia darah adalah studi tentang aktivitas enzimatiknya. Ini menentukan konsentrasi plasma dari berbagai enzim, yang terutama diproduksi oleh organ-organ tertentu. Jenis kekhususan ini memungkinkan mereka untuk digunakan sebagai kriteria diagnostik untuk berbagai penyakit yang sempit. Pada artikel ini, kita akan membahas indikator seperti tingkat amilase, yang mengacu pada penanda spesifik patologi pankreas.

Apa enzim ini

Selama bertahun-tahun, gagal berjuang dengan hipertensi?

Kepala Institut: “Anda akan kagum betapa mudahnya menyembuhkan hipertensi dengan meminumnya setiap hari.

Alpha-amylase dianggap sebagai salah satu enzim jus pankreas (pankreas), yang secara aktif terlibat dalam proses pencernaan. Ini diproduksi oleh sel eksokrin dan melalui saluran ekskresi memasuki duodenum, di mana ia bertanggung jawab untuk pemisahan komponen karbohidrat kompleks menjadi lebih sederhana. Mereka terlibat dalam pemecahan glikogen dan pati. Hasil akhir dari tindakan mereka adalah produksi glukosa sederhana, yang dikonsumsi oleh tubuh untuk membayar kembali kebutuhan energi sel.

Tetapi amilase harus mengalir secara eksklusif ke lumen usus. Biasanya, sejumlah kecil memasuki sirkulasi sistemik, karena setiap sel dalam proses aktivitas vital memiliki kontak langsung dengan darah. Selama integritas sel pankreas tidak dilanggar, konsentrasi enzim tidak melebihi batas normal. Amilase darah karena aktivitas enzimatiknya yang tinggi, yang memengaruhi jaringan tubuh mana pun, dapat menyebabkan kehancurannya. Karena itu, kuantitasnya harus dijaga pada tingkat yang konstan.

Untuk pengobatan hipertensi, pembaca kami berhasil menggunakan ReCardio. Melihat popularitas alat ini, kami memutuskan untuk menawarkannya kepada Anda.
Baca lebih lanjut di sini...

Metode dan uji untuk menentukan aktivitas amilase darah

Amilase dalam darah bersirkulasi dengan cara ini: enzim disekresikan oleh sel pankreas kelenjar, memasuki darah dan dibawa ke semua pembuluh darah. Di hati, sebagian dinetralkan. Bagian enzim itu, yang tidak punya waktu untuk runtuh, melewati filter ginjal, di mana ia terkonsentrasi dan diekskresikan dalam urin. Mekanisme ini adalah dasar untuk menentukan konsentrasi alpha-amylase dalam berbagai cairan biologis.

Analisis utama meliputi:

• Analisis biokimia untuk menentukan alpha-amylase darah;
• Analisis biokimia urin untuk penentuan urin amilase (analisis diastase).

Dalam praktik klinis, metode kedua sering digunakan, karena secara teknis lebih mudah dilakukan dan tidak memerlukan pengambilan sampel darah. Selain itu, lebih sensitif dan spesifik. Memang, dalam volume darah dan cairan ekstraseluler yang stabil, enzim berada dalam keadaan lebih encer daripada dalam jumlah kecil urin. Oleh karena itu, aktivitas amilase urin beberapa kali lebih tinggi daripada plasma darah.

Kinerja normal

Mengevaluasi hasil analisis, mereka harus dibandingkan dengan standar tertentu. Penting untuk mempertimbangkan bahwa norma menyiratkan penilaian dalam unit pengukuran tertentu. Karena itu, pastikan untuk memperhatikan karakter-karakter yang terdaftar setelah angka di kolom hasil analisis. Selain itu, laju amilase, sebagaimana ditentukan di laboratorium yang berbeda, dapat berbeda karena penggunaan reagen dengan sensitivitas yang berbeda. Biasanya, angka ini ditunjukkan oleh laboratorium di sebelah hasil.

Indikator standar yang diterima secara umum dari diastase dan alpha-amylase dalam tabel.

Biokimia, yang menentukan aktivitas amilase darah, dicirikan oleh fakta bahwa laju amilase pada wanita dan pria identik. Hormon seks tidak memiliki efek signifikan pada enzim ini.

Penyebab dan mekanisme untuk meningkatkan indikator

Interpretasi yang benar dari hasil analisis untuk menentukan konsentrasi amilase dalam plasma atau urin benar-benar dapat membantu dalam diagnosis sejumlah penyakit. Dalam praktik klinis, yang paling sering ditemui adalah situasi di mana amilase atau diastasis meningkat. Ini menunjukkan apa yang berasal:

• Peningkatan aktivitas sekretori pankreas;
• Adanya hambatan dalam saluran pankreas atau kompresinya, yang mempersulit keluarnya jus pankreas yang mengandung amilase;
• Kasih sayang dari jaringan pankreas adalah proses traumatis, inflamasi, nekrotik (destruktif) atau neoplastik.

Oleh karena itu, peningkatan alpha-amylase darah dan urin diastase mengacu pada penanda spesifik untuk penyakit seperti pankreas dan salurannya:

1. Dengan eksaserbasi pankreatitis kronis;
2. Dengan pankreatitis akut, nekrosis pankreas fokal (penghancuran sendiri jaringan kelenjar oleh enzim), infiltrasi peripancreatic, atau pada tahap awal nekrosis pankreas berat;
3. Kanker pankreas. Laju amilase terlampaui sampai batas yang lebih besar ketika tumor terletak di kepala dan tubuh organ;
4. Berbagai jenis cholelithiasis dengan choledocholithiasis (migrasi batu ke saluran empedu);
5. Kekalahan dari puting duodenum besar duodenum dalam bentuk papillitis stenotik, batu terjepit dan tumor kanker.

Peningkatan aktivitas amilase pada penyakit dan kondisi lain

Kadang-kadang Anda harus menghadapi situasi di mana tidak ada masalah nyata dengan pankreas, tetapi indikator alfa-amilase dan diastase melampaui batas normal. Ini berarti ada:

• Kesalahan dalam diet;
• Penggunaan minuman beralkohol;
• Eksaserbasi kolesistitis kronis dan proses inflamasi di hati;
• Kehamilan ektopik;
• Penyakit peradangan pada organ perut (ulkus perforasi, radang usus buntu, peritonitis, obstruksi usus, dan lainnya);
• Infeksi virus disertai oleh poliglandulitis (perubahan inflamasi multipel di hampir semua saliva dan pankreas). Itu terjadi dengan infeksi parotitis, sitomegali dan virus Epstein-Barr.

Kurangi

Dekripsi tes, yang hasilnya mencatat penurunan aktivitas amilase darah, jarang diperlukan. Tapi tetap saja, terkadang Anda harus menghadapinya. Ini dimungkinkan dengan:

• Kehancuran pankreas yang lengkap atau hampir lengkap akibat nekrosis pankreas;
• Transformasi kanker pada sebagian besar pankreas, di mana praktis tidak ada sel normal dengan kemampuan fungsional yang terjaga;
• Pengangkatan seluruh atau reseksi subtotal pankreas;
• Gangguan genetik dari aktivitas enzim dalam tubuh (cystic fibrosis).

Tingkat amilase dalam darah dan diastase kemih adalah andalan yang menunjukkan arah jalur diagnostik untuk penyakit pankreas. Penilaian tes yang tepat dalam kombinasi dengan perbandingan hasil dari jenis penelitian lain menyisakan sedikit peluang sejumlah penyakit tidak diketahui.

Nilai klinis dan diagnostik untuk menentukan aktivitas alpha-amylase

Dalam darah dan urin

Aktivitas alfa-amilase darah dan urin pada siang hari (dan juga dari satu hari ke hari lainnya) sangat bervariasi. Selain itu, perbedaan individu yang signifikan dari indikator ini diamati pada subjek tanpa patologi organ pencernaan. Mengingat fluktuasi dalam ekskresi alfa-amilase dalam urin, dianjurkan untuk menyelidiki aktivitas enzim dalam urin yang dikumpulkan per hari.

Perubahan aktivitas alpha-amylase dalam darah dan urin terjadi selama kehamilan. Hiperamalasemia. Aktivitas alpha-amylase meningkat secara signifikan dengan penyakit pankreas. Pada pankreatitis akut, aktivitas enzim dalam darah dan urin meningkat 10-40 kali. Hiper-amilasemia terjadi pada permulaan penyakit, mencapai maksimum 12-24 jam setelah perkembangan, kemudian menurun dengan cepat dan mencapai normal setelah 2-6 hari.

Aktivitas enzim dapat ditingkatkan pada sejumlah penyakit yang memiliki gambaran klinis yang serupa dengan pankreatitis akut, yaitu: radang usus buntu akut, peritonitis, dan ulkus lambung dan duodenum berlubang. Pada pasien dengan peritonitis, peningkatan aktivitas amilase adalah konsekuensi dari perkembangan bakteri pembentuk amilase. Biasanya, aktivitas enzim dalam kondisi patologis ini meningkat 3-5 kali.

Penyakit yang menyebabkan hyperamylasemia yang relatif kecil yang berasal dari non-pankreas (yaitu, tanpa secara langsung mempengaruhi pankreas itu sendiri) termasuk kolesistitis, cholelithiasis, suatu kondisi yang terkait dengan ruptur kandung empedu, penyakit ginjal, gagal ginjal, metastasis dari tumor kanker di paru-paru, dan kerusakan kelenjar ludah. dengan perolehan duktusnya (gambaran klinis parotitis yang jelas memudahkan hiperamylasemia), prostatitis, cedera otak traumatis, syok traumatis, luka bakar, pneumonia, ketoasidosis diabetikum, aborsi, periode pasca operasi.

Aktivitas alfa-amilase dalam serum juga meningkat dengan perforasi esofagus, tukak lambung, gastritis, obstruksi usus akut, iskemia dan infark usus kecil, peritonitis, pecahnya tabung selama kehamilan ektopik, salpingitis, aneurisma aorta.

Penyebab utama hyperamylasemia adalah: gangguan pengeluaran sekresi dari kelenjar (produsen alpha-amylase), peningkatan permeabilitas dari penghalang histohematogen di kelenjar, nekrosis jaringan, gangguan pelepasan enzim melalui filter ginjal.

Beberapa hormon lain dan banyak obat farmakologis, terutama agen-agen yang mengarah pada pengurangan sfingter Oddi, menyebabkan adrenalin: adrenalin, histamin, sekretin, furosemide, salisilat, antikoagulan, morfin, pantopon, opium, kodeium, tetrasiklin, dan juga alkohol.

Terlepas dari kenyataan bahwa hyperamylasemia hampir selalu disertai dengan peramylazuria, penentuan aktivitas alfa-amilase urin mungkin tidak selalu menjadi indikator diagnostik yang akurat, karena pelepasan amilase ke dalam urin berhubungan dengan fungsi ginjal. Selain itu, ginjal mengeluarkan hanya 24% dari amilase yang dikeluarkan oleh kelenjar pencernaan dari darah.

Studi tentang aktivitas alfa-amilase dalam urin harian adalah tes biokimia yang lebih andal untuk mendeteksi penyakit pankreas daripada studi yang didasarkan pada analisis satu porsi saja. Setelah aktivitas alfa-amilase darah setelah serangan pankreatitis kembali normal, dapat tetap meningkat dalam urin hingga 7 hari.

Koefisien "aktivitas alfa-amilase darah / aktivitas alfa-amilase urin" adalah indikator kegunaan fungsional dari filter ginjal.

Hypoamylamine dalam praktek klinis jarang terjadi. Ini diamati pada pasien dengan penyakit hati (hepatitis, sirosis), tumor ganas (terutama di hadapan metastasis di hati), luka bakar yang luas, kulit, diabetes, hipotiroidisme, gangguan makan umum, penurunan berat badan, cachexia, dan juga di bawah pengaruh keracunan ( misalnya, dalam kasus toksikosis pada wanita hamil). Penurunan aktivitas alfa-amilase paling sering menunjukkan ketidakcukupan fungsi eksokrin kelenjar sub-lambung. Pengenalan sitrat dan oksalat menyebabkan penurunan aktivitas enzim.

Penentuan aktivitas dehidrogenase laktat total

Laktat dehidrogenase (L-laktat; NAD-oksidoreduktase, EC 1.1.1.27) adalah enzim glikolitik (mengandung cytosolic zinc) (berat molekul 135.000 D) yang secara reversibel mengkatalisasi oksidasi L-laktat menjadi asam piruvat. Partisipan yang sangat diperlukan dalam reaksi ini adalah nikotin adenin dinukleotida teroksidasi, digunakan sebagai kofaktor enzim yang berperan sebagai akseptor hidrogen.

Reaksi yang dikatalisis oleh laktat dehidrogenase dapat dinyatakan sebagai berikut:

SNSNONSOO "+ LEBIH DARI + Laktat dehidrogenase SNSSOSOO '+ LEBIH • H + H +

Enzim ini didistribusikan secara luas pada manusia. Menurut tingkat penurunan aktivitas enzim, organ dan jaringan dapat diatur dalam urutan berikut: ginjal, jantung, otot rangka, pankreas, limpa, hati, paru-paru, serum darah. Dalam yang terakhir, beberapa protein berbeda (isoenzim) telah ditemukan yang memiliki sifat katalitik enzim ini. Perubahan struktur bagian protein dari isoenzim menentukan sifat fisikokimia yang berbeda (khususnya, mobilitas elektroforesis yang berbeda dalam agar, pati, poliakrilamida dan gel lainnya).

Dalam plasma (serum) darah, lima isoenzim dehydrogeaza laktat - LDG1, LDG2, LDGz, LDG4, LDG5 - diidentifikasi, yang terletak di gel dalam urutan menurun dari mobilitas elektroforetik mobilitasnya.

Setiap isoenzim adalah tetramer yang dibentuk oleh subunit H dan M. Telah ditetapkan bahwa fraksi LDH1 berasal terutama dari jaringan jantung, LDH5 - dari hati. LDH dalam sitoplasma sel dan serum diwakili oleh 5 isoenzim.

Subunit M ditemukan terutama dalam jaringan dengan metabolisme anaerob, sedangkan subunit H hadir dalam jaringan dengan dominasi proses aerobik. Metode elektroforesis pada pembawa membantu untuk membagi semua 5 isoenzim LDH, yang mewakili persentase berikut dalam serum darah orang sehat: LDH; (14–26%), LDH ^ (29–39%), LDHs (20–26%), LDH4 (8–16%), LDHs (6–16%) - V.N. Titov et al. (1988).

Laktat dehidrogenase tidak hanya terkandung dalam plasma, tetapi juga dalam jumlah yang signifikan dalam sel darah merah, sehingga serum yang digunakan untuk analisis harus segar, tanpa hemolisis.

Metode untuk menentukan aktivitas total LDH dibagi menjadi dua kelompok utama: 1) kinetik, berdasarkan uji Warbur-optik (efek optik yang terkait dengan konversi NAD ke NAD • N, dan sebaliknya) dan 2) metode yang menentukan jumlah produk yang dibentuk atau dikonsumsi substrat setelah periode inkubasi tetap (metode titik akhir).

Pekerjaan No. 32 Metode kolorimetri dinitrophenylhydrazine untuk menentukan aktivitas laktat dehidrogenase dalam serum darah (menurut Sevel dan Tovarek)

Prinsip metode. L-laktat dalam media alkali dengan adanya serum LDH dan ditambahkan NAD dioksidasi menjadi piruvat. Menurut derajat pembentukannya dan dinilai aktivitas enzimnya.

Reagen

1. 0,45 mol / l larutan asam natrium laktat. Dalam labu volumetrik dengan kapasitas 100 ml, tambahkan 5 ml asam laktat pada konsentrasi 800 g / l dan 10 ml asam laktat pada konsentrasi 400 g / l dan netralkan dengan larutan 2N natrium hidroksida menjadi reaksi alkali lemah dengan pH 7,5 (menggunakan fenolftalein harus mengembangkan asam lemah warna merah muda). Volume dibawa ke tanda dengan air suling.

2. 0,03 mol / l larutan natrium pirofosfat, pH 8,8. Dalam labu volumetrik dengan kapasitas 500 ml berkontribusi 6,69 g Na₂ R₂O₅ • N₂Sekitar 50 ml diet dari air yang diencerkan, campuran tersebut dicampur dengan seksama dan pH larutan diatur menjadi 8,8 dengan larutan 1N HCl. Volume isi labu disesuaikan dengan tanda dengan air suling. Pereaksi stabil selama satu bulan saat disimpan dalam lemari es.

3. Solusi NAD. 3 mg NAD (secara kimiawi murni) dilarutkan dalam 1 ml air suling (dengan laju 0,6 mg per sampel). Pereaksi stabil selama 4 minggu saat disimpan dalam lemari es.

4. Larutan 2,4-dinitrophenylhydrazine. 19,8 mg 2,4-dinitrophenylhydrazine dilarutkan dalam volume kecil larutan asam klorida 1N dengan memanaskan campuran dalam penangas air. Setelah pendinginan, volumenya disesuaikan menjadi 1 ml dengan asam klorida 1N. Keesokan harinya, reagen disaring. Solusinya disimpan dalam piring kaca gelap, dapat digunakan selama satu tahun.

5. 0,4 n larutan natrium hidroksida.

6. 1 n larutan asam klorida.

7. Larutan standar natrium asam piruvat. 11 mg asam natrium piruvat kristal dilarutkan dalam sejumlah kecil air suling, dipindahkan ke dalam labu ukur 100 ml, dan volume larutan dibuat sampai tanda dengan air suling. 1 ml larutan mengandung 110 μg natrium piruvat, yang sesuai dengan 88 μg asam piruvat. Solusi standar kerja disiapkan dengan mengencerkan 10 kali utama dengan air suling. Dalam 1 ml larutan kerja 8,8 μg asam piruvat.

Jalannya tekad. 0,1 ml serum encer 1: 2 dicampur dengan 0,3 ml larutan NAD dan dipanaskan selama 5 menit pada suhu 37 ° C. Kemudian 0,8 ml larutan pemanas asam fosfat dan 0,2 ml larutan asam natrium laktat, yang sebelumnya dipanaskan pada 37 ° C Campuran diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 15 menit.Setelah inkubasi, sampel diisi dengan 0,5 ml 2,4-dinithophenylhydrazine dan disimpan pada suhu kamar selama 20 menit. Kemudian tambahkan 5 ml larutan natrium hidroksida, campur isi tabung dan setelah 10 menit

Penyerapan diukur dalam kisaran panjang gelombang 500-560 nm, misalnya, pada PEC dengan filter lampu hijau dalam kuvet dengan ketebalan lapisan 10 mm. Catat kepadatan optik sampel, dengan mempertimbangkan kontrol penyerapan.

Sampel kontrol dimasukkan dengan cara yang sama seperti percobaan, tetapi serum 1: 2 yang diencerkan ditambahkan setelah menginkubasi campuran. Hitung aktivitas enzim sesuai dengan grafik kalibrasi. Aktivitas laktat dehidrogenase dinyatakan dalam mmol asam piruvat, yang dibentuk dengan menginkubasi 1 liter serum selama 1 jam pada suhu 37 ° C.

Untuk mendapatkan data untuk membuat grafik kalibrasi, Anda harus melakukan hal berikut. Dari larutan standar kerja asam natrium piruvat, siapkan serangkaian pengenceran (Tabel 2). Kemudian tuangkan 0,5 ml larutan 2,4-dinitrophenylhydrazine dalam tabung. Selanjutnya, proses sampel standar dengan cara yang sama dengan yang berpengalaman.

Saat menempatkan sampel kontrol, tambahkan 0,6 ml air suling, 0,8 ml larutan pirofosfat dan 0,5 ml larutan 2,4-dinitrophenylhydrazine ke dalam tabung. Selanjutnya, sampel diperlakukan sama berpengalamannya.

Untuk menemukan indikator aktivitas dehidrogenase laktat dalam dimensi “mmol asam piruvat per 1 liter serum per 1 jam inkubasi pada suhu 37 ° C”, jumlah μmol asam piruvat dalam sampel standar dikalikan dengan faktor 120 atau jumlah μg asam piruvat - sebesar 1,41.

Untuk mengekspresikan aktivitas enzim dalam satuan dimensi baru, Anda dapat menerapkan formula lain:

Aktivitas dehidrogenase laktat dalam mmol / (h • l) = C • 120: 88,

di mana C adalah jumlah μg asam piruvat dalam sampel, 120 adalah faktor konversi μg asam piruvat menjadi mg, 88 adalah faktor untuk mengubah indikator dari mg ke mmol.

Ketika membuat grafik kalibrasi pada sumbu absis, nilai aktivitas enzim diekspresikan, dinyatakan dalam dimensi, mmol DCH • l) dan disajikan pada kolom terakhir dari tabel 33. Hubungan garis lurus antara konsentrasi asam piruvat dan kepadatan optik adalah dari 0 hingga 10 mmol / (h • l).

Nilai klinis dan diagnostik untuk menentukan aktivitas amilase

Amilase adalah enzim yang memecah pati dan glikogen. pankreas dan kelenjar ludah adalah yang terkaya. Kandungan serum amilase dikaitkan dengan asupan makanan: pada siang hari, aktivitas lebih tinggi dari pada malam hari.

Aktivitas amilase dalam serum meningkat (hyperamylasemia) dengan:

Pankreatitis akut (10-30 kali, menjadi normal selama 6-7 hari, jika aktivitas tetap meningkat selama lebih dari 5 hari, ini menunjukkan perkembangan proses kronis);

Eksaserbasi pankreatitis kronis;

Parotitis (radang kelenjar ludah);

Mungkin disebabkan oleh alkohol, adrenalin, obat-obatan.

Penurunan aktivitas amilase dalam serum (hipoamylasemia) diamati ketika:

Penyakit hati (hepatitis, ikterus obstruktif, sirosis);

Peningkatan aktivitas dalam urin (hyperamlase) diamati ketika:

Pankreatitis akut (memiliki nilai diagnostik lebih besar daripada definisi dalam serum, karena berlangsung lebih dari 7 hari);

Penurunan aktivitas enzim dalam urin (hypoamylase) diamati ketika:

Jawab pertanyaannya:

Sebutkan lokasi pelokalan, pH optimum dan nilai biologis amilase.

Tulis reaksi yang dikatalisis amilase.

Apa kelas enzim amilase?

* Apa saja penyakit utama yang ditandai dengan meningkatnya aktivitas amilase. Jelaskan alasannya.

* Ceritakan tentang penyebab, jenis, diagnosis laboratorium, dan pencegahan pankreatitis.

3.8. Pekerjaan praktis "Penentuan aktivitas serum aminotransferase".

Tujuan kerja praktek:

untuk mempelajari nilai klinis dan diagnostik penentuan serum aminotransferase;

belajarlah menentukan aktivitas aminotransferase dalam serum.

Tugas untuk pekerjaan independen:

Tuliskan dalam buku catatan prinsip dan metodologi pekerjaan praktis.

Lengkapi tempat kerja untuk pekerjaan praktis.

Lakukan kerja praktek.

Buat perhitungan yang diperlukan.

Isi formulir analisis. Nilai hasilnya.

Buat kesimpulan tentang pekerjaan dan gambar.

Jawab pertanyaan tambahan.

Sebagai hasil dari transaminasi, yang terjadi di bawah aksi AsAT dan AlAT, asam oksaloasetat dan piruvat terbentuk. Ketika larutan 2,4-dinitrophenylhydrazine ditambahkan, proses enzimatik berhenti dan hidrazon asam piruvat muncul. Dalam media alkali, mereka memberikan pewarnaan, yang intensitasnya sebanding dengan jumlah asam piruvat yang terbentuk.

1. Larutan referensi asam natrium piruvat - 2 mmol / l.

2. 2,4 - dinitrophenylhydrazine - 1 mmol / l.

3. Sodium hydroxide - 0,4 n..

4. Substate AsAT / AlAT.

2. FEC, kuvet per cm.

4. Rak tabung reaksi.

5. Pipet untuk 1 dan 5 ml.

Lakukan studi tentang aktivitas aminotransferase dalam serum sesuai tabel.

Nilai diagnostik untuk menentukan aktivitas serum amilase serum

Pada manusia, alpha-amylase disekresikan oleh pankreas dan kelenjar ludah, aktivitas kecilnya ditemukan di jaringan hati dan otot rangka. Massa molekul alfa-amilase relatif rendah, tidak seperti kebanyakan enzim, ia disaring dalam glomeruli ginjal dan terkandung dalam urin. Alpha-amylase terdiri dari dua isoenzim: tipe pankreas (tipe-P) dan saliva (tipe-S). Pada orang sehat, serum menyumbang sekitar 70% dari aktivitas amilolitik dalam isoenzim saliva, dalam urin, sekitar persentase yang sama adalah isoamylase pankreas.

Hiperamilasemia dan hiperamalazuria diamati pada banyak penyakit, tetapi paling jelas pada pankreatitis akut, di mana aktivitasnya meningkat terutama (hingga 90% atau lebih) karena isoenzim pankreas. Dengan penyakit ini, jumlah amilase tertinggi dalam darah dan urin tercatat dalam 1-3 hari pertama. Hepatitis virus dan kanker pankreas juga menyebabkan hiperamilazuria pankreas yang berasal dari pankreas.

Dengan hiperamylasemia non-pankreas, termasuk kerusakan kelenjar ludah, gagal ginjal. Alasan peningkatan b-amilase dalam darah adalah gangguan sekresi kelenjar yang mengandung b-amilase, ketidakcukupan ekskresi amilase ginjal dari tubuh.

Banyak zat farmakologis, kortikosteroid, salisilat, tetrasiklin, furosemid, histamin menyebabkan hiperamalasemia. Untuk b-amilase darah ditandai dengan variasi intra-dan antarindividu yang luas. Yang paling informatif adalah definisi isoamylase pankreas.

Perubahan aktivitas alpha-amylase dalam patologi.

Penentuan aktivitas alpha-amylase memperoleh nilai klinis dan diagnostik dalam diagnosis dan pemantauan penyakit pankreas, sistem pencernaan, kerusakan pada organ-organ rongga perut. Dalam beberapa kasus (misalnya, pada penyakit pankreas), aktivitas hanya satu isoenzim, alpha-amylase pankreas, memiliki kepentingan diagnostik; ketika memantau penyakit pada saluran pencernaan, perlu untuk membandingkan aktivitas enzim dalam serum (aktivitas sekretori dan penyerapan tambahan dari rongga perut) dan urin (seringkali tingkat amilazuria lebih stabil dan indikator jangka panjang daripada amilasemia).

Nilai aktivitas alfa-amilase yang meningkat diamati dengan:

Penyakit pankreas inflamasi (pankreatitis akut, bengkak, kronis, reaktif). Hyper-amylasemia biasanya akut (10-40 kali lebih tinggi), tetapi sering berumur pendek, hyperamylase juga signifikan, tetapi tingkat alpha-amylase dalam urin berkurang jauh lebih lambat daripada dalam plasma darah (serum). Properti ini nyaman digunakan ketika pemeriksaan diagnostik "terlambat" pada pasien dengan tanda-tanda klinis pankreatitis, namun, untuk memantau jalannya proses, aktivitas enzim biasanya diukur pada kedua cairan biologis. Perlu dicatat bahwa bentuk parah dari lesi pankreas dengan ancaman nekrosis jaringan, serta pankreatitis, disertai dengan gangguan metabolisme lipid yang serius, dapat disertai dengan penurunan nyata atau salah (karena penghambatan amilase oleh triasilgliserida) dalam aktivitas enzim. Oleh karena itu, jika dicurigai ada bentuk pankreatitis, penting secara diagnostik tidak hanya untuk menentukan aktivitas alfa-amilase dalam urin dan serum, tetapi juga untuk menghitung pembersihan amilazo-kreatinin dengan rumus:

Pada pankreatitis akut, nilai yang dihitung ini melebihi 6%. Perhitungan izin memungkinkan Anda untuk tidak melakukan koreksi untuk volume dan waktu pengumpulan urin dan membuat hasilnya kurang tergantung pada metode penentuan yang digunakan.

Penyakit rongga perut, dengan gejala yang mirip dengan pankreatitis akut: radang usus buntu akut, peritonitis, ulkus lambung berlubang dan ulkus duodenum. Aktivitas alfa-amilase meningkat sekitar 3-5, jarang 10 kali lipat, penyebab utama hiperemia adalah sekresi enzim yang tidak terlalu meningkat, karena penyerapan sekundernya dari organ perut ke dalam darah. Untuk membedakan diagnosis, penentuan alpha-amylase dan kreatinin dalam urin dan perhitungan pembersihan kreatinin menggunakan rumus di atas dilakukan. Dengan nilai konstan dari 1-4%, harus dicurigai penyakit pada organ perut, menyamar sebagai pankreatitis akut.

Untuk alasan yang sama, aktivitas alfa-amilase meningkat secara signifikan dengan perforasi esofagus, gastritis, obstruksi usus akut, iskemia dan infark usus kecil, ruptur tuba, salpingitis, aneurisma aorta.

Pada penyakit organ internal yang tidak secara langsung terhubung dengan sistem pencernaan, peningkatan moderat dalam aktivitas total alpha-amylase dan / atau isoenzimnya mungkin terjadi. Penyakit tersebut meliputi: kolesistitis, kolelitiasis, kerusakan parenkim ginjal dan penyakit radang organ ini, gagal ginjal, prostatitis, ketoasidosis diabetik, metastasis tumor ganas pada jaringan dan organ (terutama di paru-paru, pankreas, kolon transversal). Jika dicurigai patologi yang dijelaskan di atas, analisis komparatif total dan alpha-amylase pankreas dilakukan, karena penyakit isoenzim terutama meningkat pada penyakit yang dijelaskan (kerusakan onkologis pankreas dan kolon transversus meningkatkan aktivitas isoenzim P dan S, yang memungkinkan untuk membedakan dari penyakit radang pada organ yang sama).

Hiperamalasemia yang berasal dari non-pankreas juga terjadi pada penyakit kelenjar ludah dan patologi otak tertentu. Dalam hal ini, peningkatan aktivitas alfa-amilase total juga terjadi karena peningkatan aktivitas isoenzim saliva, dan untuk membedakan diagnosis, pengukuran paralel total dan alpha-amilase pankreas harus dilakukan (dengan aktivitas normal P-amilase, patologi yang disebutkan di atas dapat dicurigai).

Analisis komparatif dari aktivitas alfa-amilase dalam urin dan serum juga merupakan parameter diagnostik yang berharga dalam menilai patologi ginjal. Ketika penyaringan ginjal terganggu (pada sindrom nefrotik, glomerulonefritis, dll.), Aktivitas alfa-amilase dalam urin berkurang tajam, sedangkan hiperamlazemia sedang atau signifikan dicatat dalam darah, oleh karena itu koefisien serum amilase / urin amilase merupakan salah satu parameter diagnostik utama dengan patologi ini.

Kondisi pasca operasi (respons inflamasi sistemik terhadap pembedahan, perkembangan ARDS, dll.) Juga dapat menyebabkan hiperamilemia sedang.

Penurunan aktivitas alfa-amilase biasanya menyertai penurunan aktivitas fungsional pankreas, yang disebabkan oleh kerusakan parenkim organ dan / atau gangguan regulasi eksokrin, dan paling sering terjadi ketika:

Perubahan nekrotik pada pankreas terkait dengan pankreatitis hemoragik dan total nekrosis pankreas.

Dengan penyakit hati (hepatitis, sirosis). Tumor ganas, terutama di metastasis hati.

Ketidakseimbangan endokrin berat: hipotiroidisme, diabetes mellitus, hiperlipemia (terutama dengan kelebihan triasilgliserida, karena penghambatan pusat aktif enzim), dengan gangguan nutrisi umum, cachexia, dan toksikosis pada wanita hamil.

Dalam beberapa kasus, dengan patologi yang dijelaskan di atas, aktivitas serum alfa-amilase mungkin tidak menurun, tetapi tetap tidak berubah.

Hubungan utama dalam diagnosis banding patologi dengan gejala yang sama.

Rasio yang paling umum adalah:

Komponen alpha-amylase / pankreas total. Digunakan dalam diagnosis banding proses inflamasi dan ganas di organ perut dan beberapa jaringan lainnya. Dalam proses inflamasi yang tidak mempengaruhi pankreas, sumber utama aktivitas total alpha-amylase adalah enzim saliva, oleh karena itu rasio “Total amylase / isoform pankreas”> 1. Pada kerusakan ganas pada organ perut, kontribusi kedua isoenzim kira-kira sama, dan koefisien ini kira-kira sama dengan 1 8-2.4. Dengan keterlibatan pankreas dalam proses inflamasi atau dengan adanya tumor metastasis di dalamnya, rasio aktivitas amilase total dan pankreas tidak melebihi 1,5.

Total alpha-amylase / kreatinin dalam urin dan serum. Izin yang dihitung digunakan (formula diberikan dalam ayat 3), memungkinkan membedakan proses inflamasi di pankreas (rasio melebihi 6%) dan organ perut (1-4%).

Total serum alpha-amylase / Total urine alpha-amylase. Digunakan untuk menilai aktivitas fungsional filter ginjal. Pada sindrom nefrotik dan glomerulonefritis, koefisien lebih tinggi dari 2-2,5.

Total serum alpha-amylase / Serum Trigliserida. Rasio ini "terbalik", karena kelebihan triasilgliserida dapat menghambat aktivitas alfa-amilase. Hal ini memungkinkan untuk membedakan penurunan patologis dalam produksi enzim dan gangguan dengan hiperipmia.

Total serum alpha-amylase / Lipase pankreas. Makna biologis dan diagnostik dari koefisien ini mirip dengan rasio sebelumnya, karena adanya triasilgliserida bebas dalam serum secara langsung berkaitan dengan aktivitas lipase pankreas. Proporsinya langsung.

Perubahan aktivitas alpha-amylase pada orang sehat. Gangguan dengan obat-obatan.

Aktivitas alpha-amylase dalam plasma darah orang sehat secara substansial tergantung pada sifat diet dan makanan yang berlaku dalam diet. Selain itu, parameter ini sangat tergantung pada intensitas proses metabolisme pada individu tertentu, serta pada aktivitas otak subjek. Oleh karena itu, aktivitas enzim pada individu yang sama pada waktu yang berbeda (bahkan pada hari yang sama) dapat bervariasi dalam kisaran 25-50% di kedua arah.

Hiper-amilasemia pada orang sehat dapat disebabkan oleh keadaan emosional (stres, peningkatan aktivitas mental), minum (bahkan sekali) alkohol, dan juga dikaitkan dengan diet kaya protein dan kehabisan karbohidrat dan gula. Hipoamylasemia terjadi dengan peningkatan pemanfaatan glukosa, dengan puasa, olahraga aktif, serta pada orang dengan hiperlipidemia, bahkan tanpa adanya manifestasi klinisnya.

Pada kehamilan hingga 19 minggu, aktivitas alfa-amilase diturunkan dibandingkan dengan normanya, dalam hal usia kehamilan 33-34 minggu, tingkat aktivitas meningkat, dan pada 37-40 minggu stabil di tingkat 10-20% lebih tinggi daripada aktivitas enzim pada wanita sehat yang tidak hamil..

Aktivitas alfa-amilase dan isoenzim pankreasnya juga secara signifikan dipengaruhi oleh penggunaan sejumlah obat-obatan umum yang digunakan oleh orang-orang yang secara praktis sehat jika penyakit menular dan inflamasi sementara - misalnya, antibiotik tetrasiklin, furosemide, obat antiinflamasi kortikosteroid, salisilat.

Juga, dampak signifikan pada aktivitas alfa-amilase memiliki obat-obatan yang mengarah pada pengurangan sphincter Oddi, termasuk hormon (adrenalin, histamin, sekretin), zat narkotika (morfin, pantopon, opium, kodein) dan obat lain yang meningkatkan sekresi enzim dan menekan keluarnya sekresi dari pankreas.

Berdasarkan biofile.ru

Prinsip metode: Maltotrioside yang terkait dengan kromogen 2-kloro-p-nitrofenol digunakan sebagai substrat untuk α-amilase. Di bawah aksi a-amilase, substrat dihidrolisis untuk melepaskan 2-kloro-p-nitrofenol, maltotriosa, dan glukosa berwarna. Reaksi berlangsung dengan cepat dan tidak memerlukan adanya koenzim dalam campuran reaksi. Tingkat hidrolisis substrat berbanding lurus dengan aktivitas a-amilase dalam sampel dan diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 405 nm.

Substrat-CNF ————> CNF + Glukosa + Maltotriose

Linearitas metode: hingga 1500 U / l.

a-Amilase dalam serum non-hemolisis tetap stabil pada suhu kamar (18-25 ° C) selama 7 hari, pada suhu penyimpanan 2-8 ° C selama 2 bulan.

1) Spektrofotometer dengan kuvet yang dikontrol suhu, panjang gelombang 405 nm, panjang jalur optik 1 cm; suhu reaksi 37 ° C;

3) Pipet otomatis untuk 25 μl dan 1000 μl;

Cairan saliva juga dapat digunakan sebagai sumber enzim (saliva sebelumnya diencerkan dengan air suling 100 kali), tetapi kisaran normanya sangat bervariasi.

6) Reagen yang bekerja (substrat - 1,8 mmol / l dalam buffer MES (pH 6,0 ± 0,1)).

Pereaksi yang bekerja cocok untuk digunakan jika kerapatan optiknya tidak lebih tinggi dari 0,6 unit kerapatan optik. pada panjang gelombang 405 nm dan tidak ada kekeruhan.

Sebelum analisis, pereaksi harus dipanaskan hingga suhu pengukuran (37 ° C).

Aduk isi tabung dan nyalakan stopwatch. Ukur densitas optik sampel terhadap air suling pada panjang 405 nm tepat 1 menit. Ulangi pengukuran 3 kali dengan interval 1 menit. Hitung perubahan kepadatan optik per menit, dan kemudian hitung rata-rata pengukuran kepadatan optik per menit (Dop / mnt).

Perhitungan aktivitas faktor a-amilase dilakukan dengan rumus:

di mana Dop / min adalah perubahan rata-rata dalam kepadatan optik per menit;

1.025 - volume total larutan dalam kuvet;

1000 adalah faktor konversi ml ke l;

12,9 - koefisien serapan milimolar 2-kloro-p-nitrofenol;

0,025 adalah volume serum dalam ml;

1.0 adalah panjang jalur optik.

Saat melakukan perubahan pada parameter yang terdaftar, faktor tersebut harus dihitung ulang. Jika aktivitas a-amilase melebihi 1500 U / l (titik di luar linearitas grafik kalibrasi), serum yang dianalisis harus diencerkan 1: 1 dengan larutan garam dan pengukuran harus diulang, dan hasil perhitungan harus dikalikan dengan 2.

Nilai klinis dan diagnostik: a-Amilase adalah endohidrolase dan dalam tubuh manusia diwakili oleh beberapa isoenzim: enzim disekresikan oleh kelenjar ludah (tipe-S), pankreas (tipe-P); aktivitas enzim kecil ditemukan di hati, otot rangka, cairan air mata, sekresi kelenjar susu dan berbagai tumor.

Aktivitas a-amilase dalam serum meningkat secara signifikan karena P-isoenzim di berbagai penyakit pankreas (pankreatitis, abses, trauma, kanker).

Dengan cedera kelenjar ludah (kanker kelenjar ludah, parotitis endemik, makroamylasemia), aktivitas serum a-amilase juga meningkat, tetapi dengan mengorbankan S-isoenzim.

Kedua isoenzim a-amilase memiliki berat molekul kecil (45.000), sehingga mereka disaring di ginjal dan diekskresikan dalam urin. Peningkatan aktivitas amilase urin (diastasis) pada pankreatitis akut terjadi 6-10 jam lebih lambat daripada serum darah.

Berdasarkan biohimist.ru

Prinsip metode. Alpha-amylase mengkatalisis hidrolisis dari substrat pati berwarna yang tidak larut untuk membentuk pewarna yang larut dalam air biru. Jumlah pewarna yang dilepaskan sebanding dengan aktivitas enzim.

Jalannya tekad. Untuk menentukan aktivitas alpha-amylase dalam serum atau urin disiapkan secara paralel eksperimental dan sampel kontrol dan dianalisis dalam urutan berikut:

Sampel dicampur, dibiarkan selama 15 menit, disentrifugasi pada 3000 rpm selama 5 menit. Kemudian mengukur kerapatan optik sampel eksperimental terhadap kontrol di FEC pada panjang gelombang 590 nm dalam kuvet dengan ketebalan lapisan 5,0 mm.

Aktivitas enzim ditemukan pada jadwal kalibrasi.

Nilai klinis dan diagnostik untuk menentukan aktivitas alpha-amylase dalam serum dan urin: pada manusia, alpha-amylase disekresikan oleh pankreas dan kelenjar saliva, aktivitas kecilnya ditemukan di jaringan hati dan otot rangka. Berat molekul enzim relatif rendah ("48.000), sehingga disaring dalam glomeruli ginjal dan terkandung dalam urin.

Pada orang sehat, aktivitas enzim serum adalah 140 hingga 350 U / l, dalam urin 1000-2000 U / l. Aktivitas amilase meningkat, terutama, pada penyakit pankreas (pada pankreatitis akut). Penyakit kelenjar ludah dan penyakit ginjal kronis menyebabkan peningkatan aktivitas serum alpha-amylase.

Nomor kerja 5. Efek adrenalin pada glukosa dalam darah.

Kemajuan kerja. Pada kelinci, dari vena marginal telinga atau pada tikus dari vena kaudal, 0,1 ml darah dikumpulkan dan glukosa darah ditentukan dengan metode o-toluidin.

Kemudian, hewan memiliki potongan rambut di sisinya, menggosok kulit dengan alkohol dan 0,1% larutan adrenalin diambil secara subkutan pada tingkat 0,1 ml per 1 kg berat badan, dan setelah 30 menit glukosa darah kembali diukur.

Pekerjaan nomor 6. Efek insulin pada glukosa darah.

Kemajuan kerja. Dari kelinci lain dari vena marginal telinga atau dari tikus dari vena kaudal, ambil 0,1 ml darah dan tentukan kadar glukosa dalam darah.

Pada hewan, potong bulunya, perlakukan dengan alkohol, dan suntikkan insulin subkutan dengan kecepatan 1,5 unit internasional per kg berat badan. Satu jam kemudian, tentukan kembali glukosa darah. Perkenalkan hewan secara subkutan dengan larutan glukosa 5% untuk mencegah syok insulin: kelinci 10 ml, tikus - 1 ml.

Hasil ke-3 dan ke-4 bekerja di atas meja dan menarik kesimpulan.

Berdasarkan bahan www.ronl.ru

α - Amilase (diastase, 1,4 - a - D - glukan hidrolase, EC 3.2.1.1.) mengkatalisis hidrolisis ikatan α - 1,4 - glukosida dari pati, glikogen dan polisakarida terkaitnya dengan maltosa, dekstrin dan polimer lainnya. Massa molekul enzim adalah sekitar 48.000 D. Molekul tersebut mengandung atom kalsium yang tidak hanya mengaktifkan enzim, tetapi juga melindunginya dari aksi protease, dan aktivitas amilase meningkat dengan pengaruh ion klorin. Dalam darah, itu diwakili oleh dua isoenzim: pankreas - tipe P dan saliva - tipe S, yang masing-masing dibagi menjadi beberapa fraksi. Isoenzim tipe-S umumnya 45-70% (rata-rata 57%), sisanya dalam tipe-P. Kedua isoenzim memiliki sifat katalitik dan imunologi yang hampir identik, sedikit berbeda dalam mobilitas elektroforesis, tetapi dipisahkan dengan baik oleh filtrasi gel pada DEAE - Sephadex. Ada juga makroamilase, yang tidak diekskresikan oleh ginjal, tetapi dapat ditemukan dalam serum darah normal (sekitar 1% dari orang sehat) dan patologi (2,5%).

Aktivitas amilase tinggi diamati di parotis dan pankreas. Namun, aktivitasnya, meskipun jauh lebih rendah, ditemukan di usus besar dan kecil, otot rangka, hati, ginjal, paru-paru, saluran tuba, jaringan adiposa. Dalam darah, enzim dikaitkan dengan protein plasma dan elemen yang terbentuk. Aktivitas enzim adalah sama untuk pria dan wanita dan tidak tergantung pada sifat makanan yang diambil dan waktu hari.

Metode yang ada untuk mempelajari aktivitas a-amilase dalam cairan biologis dibagi menjadi dua kelompok besar:

1. Saccharifying (reductometric), berdasarkan studi tentang gula yang terbentuk dari pati dengan mengurangi efek glukosa dan maltosa.

2. Amiloklastik, berdasarkan pada penentuan residu pati yang tidak beraspal:

• sesuai dengan tingkat intensitas reaksinya dengan yodium. Metode ini lebih sensitif dan spesifik, tetapi akurasinya sangat tergantung pada kualitas pati dan optimalisasi kondisi penentuan.
• suspensi viskositas pati, tidak memiliki akurasi tinggi dan tidak digunakan sekarang.

3. Metode menggunakan substrat kromogenik - didasarkan pada penggunaan substrat - kompleks pewarna, yang di bawah aksi α - amilase hancur untuk membentuk pewarna yang larut dalam air.

4. Metode berdasarkan reaksi enzimatik yang digabungkan:

Pati + H₂Tentang Maltose + Maltotriose + Dextrin

Maltosa + N₂Tentang 2 Glukosa

Glukosa + ATP Glukosa - 6 - F + ATP

Glukosa-6-F + NADF Glukonat-6-F + NADFN

Aktivitas enzim ditentukan oleh laju akumulasi NADPH.

Dua metode amiloklastik disetujui sebagai satu: Karavey (dengan substrat pati resisten) dan Smith-Rohe.

α - Amilase mengkatalisis hidrolisis dari substrat pati berwarna yang tidak larut untuk membentuk pewarna yang larut dalam air biru. Jumlah pewarna yang dilepaskan sebanding dengan aktivitas katalitik enzim.